ифа на впг что это
Антитела IgМ и IgG к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов
Проявлениями вируса являются характерные пузырьковые высыпания на слизистых оболочках и коже. На их месте через некоторое время образуются мелкие язвочки, затем – корочки. В области, где должны появиться высыпания, вначале возникает жжение и зуд. Для герпеса характерна выраженная болезненность в области высыпаний.
Вирус герпеса распространяется по нервным окончаниям и не удаляется из организма полностью даже после курса лекарственной терапии. Он способен существовать в активном и «спящем» состоянии.
Вирусы простого герпеса 2 и 1 типов передаются половым путём и контактно, даже в случае, когда симптомы заболевания у носителя ещё не заметны. На ранних стадиях инфицирования симптомы обычно совсем отсутствуют, поэтому поставить диагноз на начальных этапах можно только лабораторно. Первичное заражение вирусом чаще всего происходит в детстве, ещё в дошкольном возрасте.
У женщин генитальный герпес появляется обычно на половых губах и на шейке матки, реже – в области промежности. У мужчин пузырьки возникают на коже и слизистой оболочке полового члена, а также внутри уретры и прямой кишки.
Зачем делать анализы на вирус простого герпеса 1 и 2 типов?
Вирус простого герпеса 2 и 1 типа не только является причиной неприятных с косметической точки зрения высыпаний. Он также служит причиной выраженного болевого синдрома (например, по ходу нервных стволов в области высыпаний), общей слабости и поражения центральной нервной системы.
Поэтому важно знать о наличии данного вируса в организме, чтобы обеспечить необходимую профилактику обострений инфекции и своевременное полноценное лечение. Эти меры позволят предотвратить осложнения, связанные с активным прогрессированием герпетической инфекции.
Опасность вируса простого герпеса 2 и 1 типов в том, что на фоне снижения иммунитета, от которого в разные периоды жизни не застрахован ни один человек, происходит активация инфекции. Активность вируса может привести к тяжёлым осложнениям вроде поражения лицевого, слухового и других черепных и спинномозговых нервов.
Вирус простого герпеса 2 и 1 типов может серьёзно угрожать беременной женщине и будущему ребёнку. Встречается внутриутробная инфекция с тяжёлыми последствиями для нервной системы. Реактивация инфекции во время беременности способна привести к её патологическому течению или преждевременному прерыванию.
Когда нужно делать анализы на антитела к простому герпесу?
• Если возникают мелкие пузырьки на коже или слизистых оболочках;
• При ВИЧ-инфекции или иммунодефиците неизвестного происхождения;
• Появление жжения, отёчности и высыпаний в области мочеполовых органов может указывать на вирус простого герпеса 2 типа. Определение антител к вирусу простого герпеса 2 типа класса IgG и другие методы могут помочь в дифференциальной диагностике инфекций мочеполовой системы;
• При подготовке к беременности (желательно сдать анализ на антитела к простому герпесу обоим партнёрам);
• При наличии признаков внутриутробного инфицирования ребёнка или фето-плацентарной недостаточности и др.
Диагностика
Учитывая высочайшую частоту инфицирования, антитела к вирусу простого герпеса обнаруживаются у подавляющего большинства людей (больше 90 %) во всём мире. Однако титр антител и его изменение за определённый период может дать намного больше информации, важной для лечения вируса простого герпеса 2 и 1 типа.
Расшифровка анализов на антитела к вирусу простого герпеса 1 и2 типа
• IgG бывает повышен при хронической герпетической инфекции. Если антитела к герпесу IgG повышаются более чем на 30% при повторном исследовании через временной интервал в 10 дней, можно думать об активации инфекции. Если титр антител IgG к вирусу герпеса при повторных исследованиях снижается – это свидетельствует об успешности лечения и «угасании» инфекции.
Повышенные антитела к герпесу класса IgG могут указывать на внутриутробную инфекцию или вероятность её развития. Если исследование было впервые выполнено во время беременности, то судить по нему о вероятности не стоит, пока не будут проведены повторные исследования. Если же антитела IgG к вирусу простого герпеса 2 и 1 типов обнаруживались в крови и до беременности, то вероятность внутриутробной инфекции мала.
• IgA появляется в крови спустя 14 и более дней после инфицирования вирусом герпеса и не имеет решающего значения в диагностике.
Отрицательный результат анализа может указывать на отсутствие инфицирования. Однако такой же результат теста бывает в первые дни заражения герпесом или при хронической неактивной инфекции.
Определение ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типов
Исследование проводится с помощью высокочувствительной методики ПЦР (полимеразная цепная реакция). ДНК вируса определяют при исследовании соскоба из уретры, забора утренней порции мочи или спинномозговой жидкости. Если в результате анализа были обнаружены фрагменты ДНК вируса простого герпеса 2 или 1 типа – это говорит о наличии герпетической инфекции. Если вирусная ДНК не обнаружена, значит, она отсутствует во взятом образце, либо всё-таки находится там в концентрации ниже границы чувствительности теста.
В Lab4U с помощью лабораторных методов можно точно установить наличие вируса простого герпеса 2 и 1 типов, а также составить впечатление о течении инфекционного процесса и возможных осложнениях. Всё это даёт врачу ценную информацию, которая помогает в диагностике и выборе схемы лечения.
Ифа на впг что это
Авидность антител IgG к вирусу простого герпеса I и II типов – общая стабильность связывания антител с антигенами вируса, которая характеризуется низкоавидными антителами IgG в первые недели и месяцы после первичного инфицирования, их постепенным исчезновением из крови и заменой на высокоавидные антитела IgG, что позволяет благодаря определению индекса авидности отличить первичную инфекцию от рецидива.
Данный анализ используется для подтверждения или исключения недавнего первичного инфицирования вирусом простого герпеса I или II типа, дифференциальной диагностики первичного инфицирования герпес-вирусной инфекцией и реактивации хронической или латентной инфекции, оценки риска передачи герпетической инфекции плоду или новорождённому и развития связанным с вирусом осложнений.
Назначается при выявлении положительных и сомнительных результатов определения IgG- и IgM-антител к вирусу простого герпеса, при обследовании беременных с подозрением на первичное инфицирование герпес-вирусом.
Какие тесты входят в данный комплекс:
Авидность, антитела класса G, ВПГ-1, ВПГ-2, герпес-вирус человека, тип 2, герпес-вирус человека, тип 1.
Синонимы английские
Нerpes simplex virus type 1 (HSV-1); Нerpes simplex virus type 2 (HSV-2), HSV avidity antibodies (IgG).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Герпетическая инфекция (ГИ) может формировать тяжелую патологию у детей и взрослых, особенно у иммунодефицитных лиц. Наибольшую опасность это заболевание представляет для беременных женщин, у которых в результате первичной инфекции может произойти самопроизвольный выкидыш либо родиться ребенок с тяжелыми пороками развития. Важной задачей для врача является определение сроков инфицирования беременной. Кроме того, определение формы герпетической инфекции (первичная, рецидивирующая) важно с точки зрения выбора тактики лечения. Серологические тесты, в которых у обследуемых лиц определяют наличие антител к вирусу простого герпеса (ВПГ), позволяют выявлять в крови первично инфицированного ВПГ человека специфические иммуноглобулины класса М (ВПГ- Ig M) через 4-6 дней, иммуноглобулины класса G (ВПГ- Ig G) через 10-14 дней с момента клинических проявлений заболевания. Продукция I g M достигает максимального значения на 15-20-е сутки. IgM сохраняются в организме человека недолго (1-2 месяца), а IgG – всю жизнь на высоком уровне. Это обусловлено тем, что ВПГ относится к возбудителям, которые могут персистировать в организме человека неограниченно долго (пожизненно) в латентной форме. Рецидивирующий герпес обычно протекает на фоне высокой концентрации IgG, что свидетельствует о постоянной антигенной стимуляции организма больного. Однако следует иметь в виду, что далеко не всегда высокие титры коррелируют с активностью инфекционного процесса. Появление IgM у таких больных говорит об обострении болезни. IgM к ВПГ могут образовываться как при первичном инфицировании, так и при реинфекции и при реактивации вируса. Таким образом, выявление специфических IgM не является надежным и достоверным доказательством первичной герпетической инфекции. Кроме того, отсутствие IgM и/или динамики титров специфических IgG могут быть обусловлены поздним сроком взятия крови с момента инфицирования или неадекватным иммунным ответом, связанным с нарушениями иммунной системы.
Данное исследование позволяет определить антитела IgG к 1-му и 2-му типу вируса простого герпеса в сыворотке крови. Антитела IgG к вирусу простого герпеса 1-го или 2-го типа обнаруживают у 80-90 % взрослых людей, поэтому однократное их определение не имеет клинического значения. Важно наблюдать за динамикой изменения их уровня. При острой инфекции или реактивации вируса выявляется нарастание уровня антител IgG. Антитела IgG могут циркулировать пожизненно. 4-кратное нарастание уровня антител при исследовании в парных сыворотках, взятых с интервалом 7-10 суток, свидетельствует о рецидивирующей герпетической инфекции. Определение IgG в сыворотке крови к вирусу простого герпеса 2-го типа показано всем беременным, так как установлено, что инфицированные имеют в 2-3 раза больший риск спонтанного аборта и инфицирования новорождённого по сравнению с интактными пациентами.
При инфицировании вирусом простого герпеса 1-го и/или 2-го типа концентрации антител IgG на ранних стадиях инфекции могут не обнаруживаться. Уровни антител могут быть очень низкими или необнаруживаемыми в периоды между реактивациями. В подобных ситуациях можно получить отрицательный результат даже при наличии предшествующего контакта с вирусом.
Определение авидности IgG – характеристика прочности связи специфических антител с соответствующими антигенами (определяется числом связывающих участков и силой связывания). Высокая авидность специфических IgG-антител позволяет исключить недавнее первичное инфицирование. Определение индекса авидности IgG к вирусу простого герпеса 1-го и 2-го типа позволяет уточнить сроки инфицирования и дифференцировать первичную герпетическую инфекцию от обострения хронической или латентно текущей инфекции.
Вирус простого герпеса 1-го типа. Наиболее частые клинические проявления:
Вирус простого герпеса 2-го типа. Наиболее частые клинические проявления:
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Herpes Simplex Virus 1/2, IgG
Референсные значения: отрицательно.
Положительный результат означает присутствие антител IgG к HSV-1 или HSV-2, что указывает либо на активную, либо на перенесенную в прошлом герпес-вирусную инфекцию.
Отрицательный результат говорит о малой вероятности острой герпес-вирусной инфекции, а также о том, что организм до этого не контактировал с вирусом простого герпеса. Однако непосредственно после инфицирования, когда достаточное количество антител еще не выработалось, результат может оказаться ложноотрицательным. В этом случае рекомендуется дополнительный тест на IgM и повторный анализ на IgG через несколько недель.
Определение авидности IgG к Herpes simplex virus 1/2
Единицы измерения : результаты приводятся в виде индекса авидности (ИА), %.
Индекс авидности менее 50 % – низкоавидные антитела IgG к ВПГ. При первичной инфекции более 50 % антител, персистирующих в организме, обладают низкой авидностью. Если в крови при наличии IgM обнаруживаются IgG с низкой авидностью, то это свидетельствует об острой стадии первичной инфекции. Обнаружение низкоавидных IgG без присутствия IgM может иметь место при сроках инфицирования более 1 месяца. В таких случаях необходимо определять в динамике увеличение титра IgG и изменение индекса авидности.
Индекс авидности 50-60 % – пограничная авидность (серая зона). Пограничный результат указывает на позднюю первичную либо раннюю паст-инфекцию.
Индекс авидности более 60 % – высокоавидные антитела IgG к ВПГ. Наличие высокоавидных IgG при наличии IgM предполагает реактивацию герпетической инфекции либо свидетельствует о вторичном иммунном ответе в случае реинфекции ВПГ. Определение высокоавидных IgG при отсутствии IgM свидетельствует о паст-инфекции. При паст-инфекции (рецидивирующий герпес, первый эпизод непервичного герпеса) индекс авидности IgG составляет 60-100 %.
Только с наработкой высокоавидных ВПГ-IgG и стабилизацией их концентрации можно говорить об окончании острой фазы первичной герпетической инфекции.
Кто назначает исследование?
Дерматолог, инфекционист, гинеколог, уролог, педиатр.
19 Herpes Simplex Virus 1/2, IgM
13 Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК генотипирование [реал-тайм ПЦР]
1. Набор реагентов для иммуноферментного определения индекса авидности иммуноглобулинов класса G к вирусу простого герпеса 1 и 2 типов в сыворотке (плазме) крови. – ВектоВПГ-1,2-IgG-авидность. – Инструкция по применению. – 2014.
ВПГ «предскажет» снижение иммунитета, и что еще нужно знать о носительстве вируса герпеса
Близкие, но не равные
На сегодняшний день медицина выделяет всего 7 значимых для человека типов герпеса. А в этой статье речь пойдет о двух первых: простом герпесе 1 и 2 (ВПГ 1 и 2).
Оба типа структурно очень похожи между собой, оба (1, 2 или их сочетание) – выявляются почти у 90% взрослого населения, оба пожизненно остаются в нервных ганглиях, но отличаются «предпочтениями» по поражаемым органам и вероятными последствиями своего присутствия.
Так, первый (или лабиальный) тип герпеса известен многим «под именем простуды» на губах. И в большинстве случаев «базируется» именно в этой области. Но приблизительно в 20% случаев все же «мигрирует» на область половых органов, сопровождаясь признаками генитального герпеса.
В тяжелых случаях, ВПГ-1 может вызывать стоматит, конъюнктивит, пневмонию, поражение ткани (энцефалит) и оболочек (менингит) головного мозга, а также различные нейропатии.
При этом, инфицирование чаще происходит еще в детстве, «профилактируя» тем самым заражение ВПГ-2. Однако, в то же время, антитела к ВПГ-1 способны «поддерживать» бессимптомное течение инфекции, вызванной ВПГ-2.
Второй (или генитальный) тип герпеса занимает второе место «в рейтинге» инфекций, передающихся половым путем. И способен поражать кожу и слизистые наружных и внутренних половых органов.
Кроме того, персистенция ВПГ-2 у женщин связана с хроническим сальпингоофаритом (воспаление яичников и маточных труб), бесплодием и невынашиванием. А активная инфекция во время родов чревата тяжелыми осложнениями для плода.
Когда иммунитет ограничен
Отличительной чертой 1 и 2 представителей семейства герпес-вирусов является их способность эффективно ускользать от «надзора» ослабленных иммунных механизмов.
Однако, при нормальном иммунитете, антитела к ВПГ вырабатываются «по той же схеме», что и к любой другой инфекции.
Так, IgM и IgA) обнаруживаются в крови спустя 2-3 недели от начала клинических признаков, являются маркером острой «свежей» или обострения уже имеющейся инфекции, с сохранением антител максимум до 1 года.
А IgG появляются не ранее, чем через 3-4 недели и сохраняются в крови годами. Правда 100% защиты от герпеса все равно не дают и их уровень сильно зависит от индивидуальных особенностей иммунитета.
Нарушения иммунных механизмов, связаные с герпесом:
Причем у людей, регулярно страдающих от признаков ВПГ, нарушения иммунитета, как правило, имеют место еще с детства. А найти «поломанное» звено и составить схему терапии может помочь анализ крови на иммунный статус (10.0.D10.204).
Ифа на впг что это
Иммуноферментный анализ в комплексной диагностике герпесвирусных инфекций
Т.И. Долгих – заведующая Центральной научно-исследовательской лабораторией, руководитель
Академического центра лабораторной диагностики ОмГМА, доктор медицинских наук, профессор.
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования
“Омская государственная медицинская академия” Министерства здравоохранения Российской Федерации
На фоне роста иммунодефицитов, аллергических и аутоиммунных заболеваний наблюдается герпесвирусных инфекций, способных формировать тяжелую патологию различных органов и систем, приводить к инвалидизации и быть причиной летального исхода. Среди данной группы инфекций наиболее значимыми являются герпетическая (ВПГ-инфекция) и цитомегаловирусная инфекции (ЦМВ-инфекция), а также инфекция, вызываемая вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ-инфекция). Учитывая широкую распространенность этих возбудителей и сходную клиническую картину, актуальным становится вопрос об оптимальном алгоритме диагностики.
Для выбора тактики ведения пациента принципиально важно установить фазу инфекционного процесса и оценить адекватность иммунного ответа макроорганизма на воздействие патогенов. Тактика врачей по выявлению оппортунистических инфекций зачастую отличается односторонним подходом и нередко базируется на определении cпецифических антител классов IgG и IgM (в отдельных лабораториях дается лишь качественная оценка суммарных антител), что нередко “загоняет” врача в “серологический тупик” и приводит к гипо- или гипердиагностике.
Несмотря на относительно высокую стоимость анализов, использование комплекса лабораторных тестов вполне оправданно, так как этиологическая расшифровка диагноза принципиально влияет на тактику ведения пациента, определяет необходимость этиотропной и иммуномодулирующей терапии, а в отдельных случаях позволяет прогнозировать исход. Рациональное использование тест-систем на основе предложенных принципов на отдельных этапах обследования пациента позволяет избежать ненужных многократных исследований.
Наряду с полимеразной цепной реакцией (ПЦР), направленной на детекцию генетичес-
кого материала потенциального возбудителя, по-прежнему повсеместно используют иммуноферментный анализ (ИФА). Он направлен на выявление антител различных классов (IgМ, IgА, Ig) в сыворотке крови, плазме, спинномозговой жидкости. Определение суммарных антител при диагностике герпесвирусных инфекций имеет низкую диагностическую ценность, дает лишь предварительную информацию о наличии инфекции и требует дальнейшего лабораторного уточнения.
Для подтверждения диагноза и мониторинга все чаще используют иммуноблот (Western-blot, Line-blot), направленный на выявление антител к отдельным антигенам возбудителей герпес-вирусных и других инфекций.
IgM – наиболее “ранние” антитела, поскольку образуются на ранних стадиях инфекционного процесса. Они способны агглютинировать бактерии, нейтрализовывать вирусы, активировать комплемент и играют важную роль в элиминации возбудителя из кровеносного русла. Не проникают через плаценту, синтезируются еще у плода и относятся к собственным антителам новорожденных. Их наличие указывает на заражение
(в том числе и внутриутробное), свидетельствует об активном процессе. Уровень IgM-антител может повышаться при реактивации, реинфицировании или суперинфицировании.
IgG – играют основополагающую роль в гуморальном иммунитете при инфекционных заболеваниях, вызывая гибель возбудителя с участием комплемента и опсонизируя фагоцитарные клетки. Наибольшее значение в противоинфекционной защите имеет субкласс IgG2. IgG проникают через плаценту и формируют антиинфекционный иммунитет у новорожденных.
В последние годы появилась возможность определения так называемых “ранних” специфических IgG, которые обладают низкой авидностью и указывают на первичную инфекцию (данный тест используется при диагностике ЦМВ-инфекции, ВПГ-инфекции). Высокоавидные антитела являются показателем давнего инфицирования и ранее перенесенной инфекции. Авидность антител в сыворотках оценивают по индексу авидности (ИА), который выражают в %. Выявление ДНК или антигенов (“ранних белков”) возбудителя на фоне высокоавидных антител указывает на персистирующую инфекцию и свидетельствует в пользу активности инфекционного процесса.
IgA – существует в двух формах: секреторной и сывороточной. Он не проходит через плаценту. Секреторный IgA содержится в молоке, молозиве, слюне, в слезном, бронхиальном и желудочно-кишечном секрете, желчи, моче. Это основной вид иммуноглобулинов, участвующих в местном иммунитете. Синтез сывороточных IgA начинается с конца первого месяца заболевания
и продолжается до тех пор, пока антиген доступен иммунокомпетентным клеткам. Его обнаружение свидетельствует об остром или подостром процессе, реактивации и суперинфекции. Тест показателен при диагностике врожденных форм инфекций, поскольку IgA не проходят через плаценту, а нарабатываются в организме ребенка в ответ на воздействие инфекционного агента. Целесообразно его использование для определения активности инфекционного процесса при ЦМВ-, ВПГ-и ВЭБ-инфекции.
Причины ложно-положительных результатов ИФА
Как и при других реакциях, при ИФА возможен ложно-положительный результат. Причины ложно-положительных реакций следует разделить на следующие группы:
— ошибки на преаналитическом этапе, связанные с нарушением правил взятия биоматериала (рекомендуется проводить забор крови в пластиковые пробирки, предназначенные для сыворотки, лучше со свертывателем крови), гемолиз, бактериальное обсеменение крови или сыворотки (имеет место в случае нарушения температурного режима при хранении или транспортировки) пробирок с биоматериалом;
— ошибки на аналитическом этапе при нарушении технологического процесса, а также зависящие от качества тест-систем и квалификации персонала;
— ошибки на постаналитическом этапе (зависят от ответственности и квалификации персонала).
Особо следует выделить причины ложно-положительных результатов, не зависящие от сотрудников лаборатории. Наиболее часто неправильный встречается при определении специфических антител класса IgМ и может быть обусловлен наличием ревматоидного фактора, гиперпродукцией IgM при беременности, перекрестной реакцией с антигенами других возбудителей, аутоиммунным процессом, нарушением обмена веществ, липидемией и др. В данном случае использование ряда лабораторных приемов позволяют получить достоверный результат анализа. К ним в первую очередь следует отнести: удаление ревматоидного фактора из сыворотки, использование на первом этапе постановки или в качестве подтверждающих тестов высокоспецифичных тест-систем зарубежного производства, повторное исследование сыворотки, применение в качестве подтверждающего теста иммуноблота-IgM (или лайн-блота), направленного на выявление антител именно класса IgM к отдельным антигенам возбудителя. Наряду с этим, следует помнить, что IgM являются показателем острого и активного инфекционного процесса. Обнаружение ДНК возбудителя или его антигенов прямыми методами или появление антител других классов в результате переключение синтеза антител в динамике позволяют верифицировать диагноз.
При детекции IgG-антител может быть получен ложно-положительный результат, связанный прежде всего с перекрестным реагированием антигенов (например, между ЦМВ и ВПГ) и напрямую зависящий от специфичности тест-систем. Для уточнения лабораторного диагноза и исключения ложнопозитивного результата следует применять иммуноблот (Westernblot-IgG, Line-blot), предназначенный для обнаружения IgG к отдельным высокоспецифичным белкам патогена. Line-blot отличается тем, что на нитроцеллюлозную мембрану нанесены или ими усилены специфические белки, обладающие высокой диагностической информативностью.
Метод иммуноблота (Westernblot, Line-blot, recom-Line) – новое поколение референтных методов, высокоспецифичных и высокочувствительных, подтверждающих (или исключающих) диагноз при подозрении на инфекции в случае получения положительных или сомнительных (неопределенных) результатов при исследовании сыворотки крови или ликвора в ИФА. Позволяет определять антитела к отдельным антигенам возбудителя. Представляет собой индивидуальный оценочный шаблон (нитроцеллюлозную мембрану) с нанесенными раздельными белками (антигенами). Имеет возможность автоматизации исследования. Для оценки сигнала принимают во внимание положение и интенсивность окрашивания полос.
При ЦМВ-, ВПГ- и ВЭБ-инфекциях для установления активности инфекционного процесса следует: 1) принимать во внимание особенности формирования иммунного ответа пациентов различных возрастных групп; 2) учитывать диагностически значимую динамику (нарастание показателей на 2-3 порядка), если это позволяет временной фактор и не требуется оперативной диагностики (!); 3) использовать комплекс лабораторных тестов в зависимости от цели и задачи исследования, включая (особенно в случае необходимости быстрой диагностики выявление антител класса IgА, низкоавидных IgG (при первичном выявлении) и IgG в спинномозговой жидкости (при поражении ЦНС); 4) исключить сочетанное инфицирование герпесвирусами; 4) у беременных определить наличие факторов риска инфицирования плода.
Особенности лабораторной диагностики внутриутробной инфекции (ВУИ)
При подозрении у ребенка ВУИ чаще всего проводят исследования на наличие маркеров герпесвирусных инфекций. Обследование матери во время беременности в большинстве случаев позволяет исключить те инфекции, на которые получены отрицательные результаты, и вести прицельное обследование ребенка. Однако надо помнить о возможности заражения женщины в поздние сроки беременности, что в условиях хронической фетоплацентарной недостаточности и вторичного иммунодефицита (в том числе ВИЧ-инфекции) приводит к заражениию плода или новорожденного.
Если мать не была ранее обследована, то для оперативной и более достоверной диагностики ВУИ рекомендуется проводить параллельное исследование крови матери и ребенка. При этом возможны разные ситуации, вызывающие у врачей затруднения по интерпретации результатов.
Именно в диагностике неонатальной патологии наибольшее диагностическое значение имеют дополнительные тесты (определение низкоавидных антител, IgA, антигенов и (или) ДНК возбудителя). Выявление только IgG является малоинформативным ввиду циркуляции материнских антител, полученных ребенком трансплацентарно (“иммунный вклад беременной женщины”). Рекомендуется определение IgМ, IgA, ДНК или антигенов возбудителя, оценка клинических данных, сопоставление результатов общеклинического и функционального обследования.
Следует помнить, что при обследовании новорожденных на ВУИ может быть получен ложноотрицательный результат серологического исследования в результате влияния высокой концентрации материнских антител класса IgG (маскируют наличие IgM у ребенка) или иммунологической толерантности, поэтому предпочтительно использовать прямые методы диагностики, направленные на обнаружение антигенов возбудителя (РИФ) и его нуклеиновой кислоты (ПЦР) в крови или спинномозговой жидкости (при условии проведения спинальной пункции по медицинским показаниям). Под иммунологической толерантностью понимают неспособность организма к иммунному ответу на определенный антиген. Сроки ее формирования варьируют от нескольких часов до нескольких суток; длительность зависит от персистенции антигена в организме и скорости образования иммунокомпетентных клеток из их предшественников; индукции толерантности способствует неспецифическая иммунодепрессия (в том числе под влиянием лекарственных препаратов). Толерантность может возникнуть при антигенной перегрузке; она не носит постоянного характера, ее продолжительность может увеличиваться периодическим попаданием антигена. Выход из состояния толерантности может быть спонтанным или индуцированным.
Обнаружение специфических антител класса IgM и/или IgА у детей раннего возраста однозначно указывает на инфицированность ребенка (через плаценту IgM и IgА не передаются и являются собственными антителами, нарабатываемыми в присутствии антигенов возбудителя). Полученные нами данные свидетельствуют о сложности диагностики врожденной формы оппортунистических инфекций и редком обнаружении IgM у новорожденных и детей раннего возраста. При преобладании неврологической симптоматики уровень специфических антител IgG в сыворотке крови может не определяться или быть невысоким.
В данном случае наибольшее диагностическое значение имеет исследование спинномозговой жидкости на наличие специфических антител или антигенов возбудителя.
Причинами ложноотрицательного серологического исследования могут быть: 1) иммунологическая толерантность (чаще); 2) влияние высокой концентрации материнских антител класса IgG (маскируют наличие IgM и собственных IgG у ребенка), причем у серонегативных детей с врожденной инфекцией IgM, IgА и IgG могут появиться в более позднем возрасте (на 6-8 мес. жизни); 3) усиленная антигенная стимуляция иммунной системы, что имеет место при сочетанном инфицировании, особенно в случае активной вирусной инфекции (цитомегаловирусной или герпетической).
Наиболее тяжелые последствия для плода и новорожденного возникают при сочетанном инфицировании токсоплазмами и ЦМВ или ВПГ, причем такие сочетания нередки (возможно обнаружение у мертворожденного обоих внутриклеточных организмов в альвеолярных и интраальвеолярных макрофагах: включения токсоплазм обнаруживались в цитоплазме, а ЦМВ – в ядрах).
Лабораторная диагностика поражения цнс при ЦМВ-, ВПГ и ВЭБ-инфекции
Поражение мозга в виде менингита, мениго-энцефалита или энцефалита, вызванное герпес-вирусами, происходит у лиц с иммунодефицитами. Высокий риск заболевания отмечен у ВИЧ-инфицированных пациентов.
У новорожденных детей и детей раннего возраста наряду с выраженной патологией со стороны мозга может наблюдаться микро- или гидроцефалия, при нейросонографии выявляться признаки гидроцефального синдрома.
Для верификации диагноза и адекватной терапии исследование спинномозговой жидкости с целью этиологической расшифровки имеет принципиальное значение. При поражении мозга рекомендуется использовать специальные тест-системы (производства фирмы “EUROIMMUN”, Германия), предназначенные для выявления методом ИФА специфических антител в спинномозговой жидкости (с параллельным исследованием сыворотки крови).Они содержат дополнительные калибраторы для спинномозговой жидкости и позволяют дифференцировать антитела, продуцируемые интратекально, от антител, проникших из крови в спинномозговую жидкость через гематоэнцефалический барьер в результате повышения его проницаемости. Обязательно параллельное исследование сыворотки крови. Определяется соотношение IgG в ликворе и сыворотке крови и концентрация в обеих биологических жидкостях альбумина. Известно, что в случае поражения ЦНС токсоплазмами или вирусами в ликворе накапливаются специфические антитела в большом количестве. При локальном поражении мозга их уровень в ликворе значительно превышает содержание антител в сыворотке крови. Рассчитав индекс LSQ относит., можно подтвердить (или исключить) поражение мозга токсоплазмами или вирусами. Индекс более 1,5 указывает на интратекальную продукцию антител к данному возбудителю. При прогрессирующем поражении мозга этот коэффициент будет возрастать, что имеет важное диагностическое и прогностическое значение.
Ввиду продукции антител в ЦНС при различных патологических состояниях (при множественной миеломе или при рассеянном склерозе) для уточнения интратекальной продукции специфических IgG пользуются диаграммой Рейбера
(1991 г.) с определением индекса СSQ, при расчете которого учитывается концентрация альбумина, который нарабатываются только в печени, но не интратекально.
Поскольку в случае микст-инфекции при повреждении гемато-энцефалического барьера в спинномозговой жидкости могут оказаться антитела разных патогенов, то использование данных тестов позволит определить ведущего агента, ответственного за прогрессирующее поражение мозга.
Интерпретация результатов исследований на цитомегаловирусную инфекцию
Специфические антитела отвечают за лизис внутриклеточного вируса, а также ингибируют его внутриклеточную репликацию или распространение от клетки к клетке. Сыворотки пациентов после первичной инфекции содержат антитела, реагирующие с внутренними протеинами ЦМВ (р28, р65, р72). К высокоспецифичным белкам относится р130. В сыворотке выздоровевших содержатся в основном антитела, реагирующие с гликопротеинами оболочки.
Наибольшее диагностическое значение имеет детекция IgM, как показателя активности процесса, что может свидетельствовать об остром заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации. Выявление IgG у ранее серонегативных лиц также позволяет определить первичную ЦМВ-инфекцию, проводить наблюдение в динамике за лицами с клиническими проявлениями инфекции и оказывает существенную помощь при ретроспективной диагностике. Следует помнить, что у многих пациентов с выраженным иммунодефицитом (в том числе при сПИДе) и тяжелой ЦМВ-инфекции, а также у беременных и детей раннего возраста выработка антител к ЦМВ замедлена. Это проявляется обнаружением специфических антител в низкой концентрации или отсутствием положительной динамики антител. В данном случае решающее значение имеет детекция IgА, “ранних” IgG-антител (низкоавидных антител) и/или “ранних” антигенов или ДНК ЦМВ. Показатель авидности менее 40% указывает на наличие первичной ЦМВ-инфекции.
После лечения этиотропными и иммуномодулирующими препаратами при контрольных анализах, как правило, отмечается значительный подъем уровня антител IgG, при этом ИА может снижаться, что следует оценивать как положительный фактор и не спешить с назначением повторного курса. Настораживает появление в последнее время случаев с отрицательными результатами контрольных исследований на ЦМВ-инфекции на фоне персистенции ЦМВ. Это может свидетельствовать о негативной активации В-лимфоцитов после применения химических иммуномодуляторов.
Иммуноблот (Westernblot) – уникальный тест, который позволяет раздельно детектировать IgM и IgG к отдельным белкам ЦМВ, следить в динамике за сменой белков, что имеет высокое диагностическое и прогностическое значение. Антигены ЦМВ подразделяют на три категории:
1) перекрестно-реагирующий антиген с молекулярной массой 65 кДа и неопределенные антигены;
2) низко специфичный антиген с молекулярными массами 55 кДа, 52 кДа и 38 кДа;
3) высоко специфичные антигены с молекулярными массами 130 кДа и 28 кДа.
Наличие высокоспецифичных антигенов подтверждает формирование иммунного ответа к ЦМВ, а наличие хотя бы одной полосы категории 3 (pp 130 и p28) свидетельствует о положительном результате. Присутствие рр65 (предранний белок) расценивается как маркер первичной (острой) инфекции или реактивации. Не исключена его наработка при суперинфекции. По мере развития инфекционного процесса появляется p28.
Опыт работы свидетельствует о возможности использования иммуноблота как при диагностике врожденной ЦМВ-инфекции, так и приобретенной формы, в том числе у лиц с выраженным иммунодефицитом (при ограничении синтеза антител или при их поликлональной наработке).
Использование данного теста при обследовании детей, родившихся с признаками внутри-утробной инфекцией или от матерей, у которых в период беременности были клинические и/или лабораторные признаки активной инфекции, позволяет установить (исключить) внутриутробную (перинатальную) инфекцию. Если в период новорожденности РИФ (ПЦР) дают отрицательные результаты при исследовании крови, а выявление IgG (материнские антитела) не позволяет выставить ЦМВ-инфекцию, то рекомендуется провести повторное обследование через 1,5-2 месяца. В случае инфицирования появляются антитела класса IgM к “ранним” белкам (р65, р28) и/или IgG к ним, что нередко коррелирует с позитивными результатами РИФ и/или ПЦР и нарастанием клинических симптомов (прежде всего со стороны ЦНС).
Интерпретация результатов исследований на герпетическую инфекцию
Выявление ДНК или ранних белков ВПГ-1 и ВПГ-2 в лейкоцитах крови свидетельствует о репликации вируса. ИФА используется для определения антител классов IgM, IgG, IgА и авидности IgG к ВПГ. Наибольшее диагностическое значение имеет детекция IgM, как показателя активности процесса, что может свидетельствовать об остром заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации. Однако в клинически выраженных случаях, в том числе при типичном течении неонатального герпеса, специфические IgM выявляются редко. У многих пациентов с выраженным иммунодефицитом и тяжелой герпетической инфекцией (генитальный герпес), а также у беременных и детей раннего возраста выработка антител к ВПГ замедлена. Это проявляется ограниченным синтезом специфических антител (они обнаруживаются в низкой концентрации) или отсутствием положительной динамики антител. В данном случае решающее значение в диагностическом плане имеет выявление ВПГ-IgА и/или “ранних” антигенов ВПГ. Следует отметить, что индекс авидности менее 40% указывает на наличие первичной герпетической инфекции, однако такие случаи выявляются редко и встречаются преимущественно у детей. В дальнейшем на фоне рецидивов чаще всего ИА остается на высоких цифрах, в связи с чем данный тест имеет более низкую диагностическую и прогностическую информацию, чем при ЦМВ-инфекции.
Имеющийся опыт работы с тест-системами, направленными на выявление IgА к ВПГ-1 и 2, показал целесообразность его использования не только с целью диагностики, но и с целью прогнозирования течения заболевания, оценки эффективности противовирусной терапии и мониторинга. Особо важное значение тест имеет для диагностики врожденной формы герпетической инфекции, поскольку IgА относится к тем иммуноглобулинам, которые не проходят через плаценту, и его обнаружение свидетельствует о заражении. Появление IgА к ВПГ в сыворотке крови в большом количестве при наличии (или отсутствии) клинических проявлений косвенно указывает на активацию вируса и обосновывает даже при отсутствии клинических проявлений проведение иммунореабилитационных мероприятий (метод “упреждающей терапии”).
Иммуноблот (Westernblot, Line-blot) – позволяет дифференцировать в одном тесте белки, характерные для активации ВПГ 1 и 2 типов, раздельно детектировать IgM и IgG к отдельным белкам, следить в динамике за их сменой, что имеет высокое диагностическое и прогностическое значение. Источником антигенов является полный комплекс антигенов ВПГ-1 типа и гликопротеин G-2 ВПГ-2 типа, очищенный аффинной хроматографией. На нитроцеллюлозную мембрану стрипов методом прерывистого электрофореза перенесены отдельные вирусные белки предварительно культивируемого ВПГ-1, затем стрипы покрываются мембранным чипом, содержащим очищенный гликопротеин G-2 ВПГ-2.