игх что это за исследование в онкологии молочной железы
Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса рака молочной железы (PR, ER, ki67, Her2 neu)
Описание
Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса рака молочной железы (PR, ER, ki-67, Her-2 neu) — исследование биоптата ткани, меченого антителами, под микроскопом. Анализ выполняется для определения рецепторного статуса рака молочной железы.
ИГХ-исследования проводят после выполнения гистологического исследования.
Иммуногистохимическое исследование
Вид морфологического исследования тканей, полученных в ходе биопсии, и меченых специфическими антителами. В основе метода лежит принцип взаимодействия «антиген-антитело». Ткань, в которой происходит патологический процесс, экспрессирует антигены. При нанесении на образец ткани антител, образуется комплекс антиген-антитело. Благодаря меткам, он становится доступным для визуализации. Врач-патоморфолог изучает количество клеток, окрашенных маркёром. Он определяет в исследуемой ткани локализацию клеток, гормонов и их рецепторов, ферментов, иммуноглобулинов, компонентов клеток и отдельных генов.
Иммунногистохимическое исследование определяет характер иммунологических нарушений. Анализ выявляет пациенток с аутоиммунным воспалением и аутоиммунным ответом в эндометрии, что определяет тактику их ведения.
Рак молочной железы (РМЖ) — злокачественная опухоль железистой ткани молочной железы. РМЖ занимает первое место среди всех злокачественных заболеваний у женщин.
В зависимости от наличия биологических маркёров опухоли — экспрессии гормональных рецепторов (эстрогена и/или прогестерона), экспрессии HER-2 — выделяют гормон-рецептор-положительный, HER-2-положительный и тройной негативный РМЖ.
HER-2
Рецептор эпидермального фактора роста человека 2-го типа, который присутствует в тканях и в норме участвует в регуляции деления и дифференцировки клеток. Его избыток на поверхности опухолевых клеток (гиперэкспрессия) предопределяет быстрый неконтролируемый рост новообразования, высокий риск метастазирования, низкую эффективность некоторых видов лечения. HER-2-положительный РМЖ является особенно агрессивной формой данного заболевания, поэтому точное определение HER-2-статуса имеет ключевое значение для выбора тактики лечения.
Рецепторы к эстрогену (ER) и прогестерону (PR)
Эстроген и прогестерон — основные женские половые гормоны. Они вырабатываются яичниками и являются основными регуляторами деятельности репродуктивной системы женщины.
Рецепторы присутствуют в различных тканях, в том числе в молочных железах и матке.
Рецепторы к эстрогену (ER) и прогестерону (PR) являются веществами белковой природы, которые локализованы на поверхности опухолевой клетки. Под влиянием женских половых гормонов, рецепторы формируют комплекс, который стимулирует появление новых опухолевых клеток. Разрушение этого механизма лежит в основе гормонотерапии.
Иммуногистохимическое определение ER и PR способно повести дифференциальную диагностику характера опухоли, выявить чувствительность опухоли к гормонам. Анализ позволяет скорректировать и уточнить лечение, а также оценить эффективность.
Опухоли с высоким содержанием рецепторов к эстрогенам и прогестерону являются высокодифференцированными. Они обладают низкой пролиферативной активностью и характеризуются не агрессивным течением. Опухоли с такими показателями хорошо отвечают на гормональную терапию и имеют хороший прогноз. Эффективность гормональной терапии составляет около 50% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к эстрогенам, и 75% при опухолях, экспрессирующих рецепторы к обоим гормонам.
Если опухолевые клетки имеют низкое число рецепторов к эстрогенам, гормональная терапия обычно неэффективна. Исключение составляют случаи, когда опухолевые клетки экспрессируют рецепторы только к прогестерону. При таком варианте гормональная терапия эффективна у 10% таких больных.
Ki-67
Маркёр пролиферативной активности. Антиген экспрессируется только во время деления клетки, в периоде её покоя маркёр отсутствует.
Показатель позволяет понять, находится ли заболевание в активной фазе или же фазе ремиссии.
Диагностическое выскабливание слизистой оболочки матки рекомендовано проводить в среднюю и позднюю фазу пролиферации — на 7–10-й день менструального цикла.
Материалом для исследования являются парафиновый блок и предметные стекла. В случае, если материалом является образец ткани в растворе формалина, дополнительно должна быть выполнена услуга изготовления стёкол.
При проведении гистологического исследования в сторонней лаборатории необходимо предоставить протокол гистологического исследования.
Интерпретация результатов
Ответ выдаётся в виде описания микропрепарата, применяемых красителей и заключения. Заключение может интерпретировать только врач, направивший на проведение исследования.
Иммуногистохимическое исследование (ИГХ)
Иммуногистохимия является дополнительным методом исследования, применяемым в патологической анатомии при диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований, когда постановка диагноза по гистологическим препаратам не представляется возможной или требуется уточнение клинически важных молекулярных параметров опухоли.
Данная методика основана на выявлении в анализируемом образце ткани белков, специфичных для того или иного вида клеток, что позволяет отличать один вид опухоли от другого, а также выявлять маркеры, отвечающие за лекарственную чувствительность опухолевой ткани.
Зачем нужна иммуногистохимия, если уже сделано гистологическое исследование?
В ряде случаев проведения обычного гистологического исследования биопсии бывает недостаточно, что объясняется следующими причинами:
Например, диагноз практически всех лимфом и лейкозов (более 70 видов!) ставится после ИГХ исследования, а в части случаев дополнительно требуется молекулярно-генетическое исследование; в свою очередь, за гистологическим диагнозом «мелкокруглоклеточная опухоль» может скрываться до 13 различных злокачественных опухолей, каждая из которых имеет свой прогноз и требует индивидуального плана химиолучевого лечения – единственным методом, способным помочь врачу в дифференцировании этой группы опухолей, является ИГХ исследование.
Сроки выполнения ИГХ исследования
В соответствии с п.24 Приказа №179н от 24.03.2016 г. Минздрава России, срок выполнения ИГХ исследования:
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (ER, PR, Her2/neu, Ki67) в Москве
Исследование ткани молочной железы на предмет степени экспрессии генов белков, формирующих молекулярный портрет опухоли. От этих параметров зависит тактика лечения, выбор противоопухолевых препаратов и прогноз заболевания. Оценка экспрессии этих белков рекомендована ассоциацией онкологов России для лабораторной диагностики рака молочной железы.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (ER, PR, Her2/neu, Ki67)?
Подробное описание исследования
Иммунногистохимическое исследование представляет собой микроскопический анализ ткани, предварительно окрашенной высокоспецифичными антителами. Антитела – молекулы, которые ультраспецифично связываются с белками клеток. Если ими окрасить ткань опухоли, краситель проявится только в участках связывания. В данном исследовании окрашиванию подвергаются молекулы ER, PR, Her2/neu, Ki67. Немного подробнее о них:
ER (estrogen receptor): рецептор эстрогена. Эстроген – женский половой гормон. Опухоли молочной железы гормон-зависимы. Это значит, что действие гормонов определяет процесс развития опухоли и ее податливость лечению. Около 1/3 от всех случаев опухолей молочной железы вырабатывают очень много рецепторов к эстрогену, больше молекул гормона связываются с ними и вызывают внутриклеточный ответ. Усиленное связывание эстрогена с рецепторами вызывает трансформацию здоровых клеток молочной железы в опухолевые. У пациенток с высокой экспрессией ER хороший леченый эффект показывает заместительная гормональная терапия: в качестве лекарства используют молекулы, похожие на эстроген, но не вызывающие клеточного ответа. Эти молекулы занимают место на рецепторе и не дают ему связаться с настоящим эстрогеном, а значит, блокирует все его эффекты, приводящие к прогрессированию рака молочной железы (РМЖ).
PR (progesterone receptor): рецептор к прогестерону. Прогестерон – еще один женский половой гормон. Он тоже вызывает прогрессирование РМЖ. Точнее, таким эффектом обладают продукты его переработки клеткой. Его метаболиты стимулируют дополнительное деление клеток (разрастание опухоли), угнетает механизмы клеточной гибели и способствуют развитию метастазов. Помимо этого, прогестерон стимулирует выработку большего количества рецепторов к эстрогену.
Her2/neu – рецептор эпидермального фактора роста. Связывание с фактором роста дает клетке сигнал к росту и делению. Повышенная экспрессия этого белка наблюдается примерно в 30% случаев рака молочной железы. Выработка этого рецептора обуславливает агрессивность опухоли и неблагоприятный прогноз течения болезни. Her2/neu – мишень одного из противоопухолевых препаратов (трастузумаб). Трастузумаб блокирует связывание рецептора с фактором роста, опухолевая клетка не получает сигнала к выживанию и росту и развитие рака молочной железы замедляется или вовсе прекращается.
Ki67 – белок клеточного ядра, ассоциированный с клеточным делением. Чем чаще делятся клетки, тем больше вырабатывается этого белка и тем быстрее растет опухоль. Этот белок не используется в качестве мишени для лекарств, но его количество – показатель интенсивности развития опухоли и скорости ее роста. Степень экспрессии этого белка помогает прогнозировать течение болезни и оценить агрессивность опухоли.
Особенности и преимущества методики
Cветовая микроскопия гистологических препаратов обработывается маркированными специфическими антителами
Игх что это за исследование в онкологии молочной железы
Стандартизованное иммуногистохимическое исследование: рецепторный статус при раке молочной железы (PR, ER, ki67, Her2 neu). Выполняется только при наличии готового микропрепарата на предметном стекле и образца ткани в парафиновом блоке.
ИГХ-исследование (РЭ, РП, Her2/neu, Ki-67), иммуногистохимический анализ рецепторного статуса рака молочной железы.
IHC (ImmunoHistoChemistry) Test for Breast Cancer Receptor Status (ER, PR, HER2, Ki67), HER2 Overexpression by IHC, Estrogen Receptors, Progesterone Receptors, ER and PR Status, Estrogen and Progesterone Receptor Status.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Парафиновый блок с биоптатом образования молочной железы. Ткань первичной опухоли может быть получена с помощью толстоигольной биопсии, а также инцизионных и эксцизионных хирургических вмешательств. Для выявления метастазов на биопсию могут быть взяты ткани из стенки грудной клетки, регионарных лимфоузлов или отдаленных органов.
Общая информация об исследовании
Современные принципы и стратегии лечения рака молочной железы основываются, в том числе, на результатах оценки рецепторного статуса и пролиферативного потенциала опухолевых клеток. Клетки опухоли обладают способностью вырабатывать и располагать на своей поверхности специальные белки – рецепторы, стимуляция которых приводит к запуску клеточного деления и росту опухоли. Подобные рецепторы способны связываться с веществами, присутствующими в организме в норме и исходно никак не связанными с развитием злокачественного новообразования. Согласно актуальным клиническим рекомендациям, для рака молочной железы имеет значение наличие на опухолевых клетках следующих рецепторов, различные комбинации которых называются рецепторным статусом:
Рецепторы к гормонам – эстрогенам и прогестерону (ER, PR). Значительная часть опухолей молочной железы является гормонально-зависимыми, то есть их рост поддерживается и стимулируется эстрогенами и прогестероном. Опухоли с положительным гормональным рецепторным статусом хорошо отвечают на терапию аналогами гормонов (тамоксифен), которые блокируют соответствующие рецепторы – связываются с ними, но не вызывают активации внутриклеточных процессов и не дают рецептору впоследствии связаться с гормоном. Таким образом, исследование продукции опухолью ER и PR позволяет определить ее чувствительность к этим препаратам.
Рецептор второго типа к человеческому эпидермальному фактору роста (human epidermal growth factor receptor 2 – HER2/neu). В клетках некоторых опухолей молочной железы имеет место повышенная выработка данного рецепторного белка, который, соединяясь с естественным фактором роста, запускает в опухолевой клетке процесс деления. Общее число пациенток с HER2-положительным раком молочной железы составляет от 15% до 20%. Определение HER2/neu имеет не только прогностическое значение (такие опухоли обычно прогрессируют быстрее и имеют более агрессивное клиническое развитие), но и позволяет оценить возможность применения таргетных лекарственных препаратов – моноклональных антител к рецептору HER2 – трастузумаб (герцептин), лапатиниб, пертузумаб. Кроме того, HER2-позитивные опухоли резистентны к тамоксифену.
Пролиферативная активность – показатель способности опухолевых клеток к неограниченному делению, которое является основным фактором биологической агрессивности опухоли. Процесс деления сопровождается появлением в клетке определенных белков, один из которых – Ki-67. Он не продуцируется в клетках в состоянии покоя, что позволяет использовать его как маркер пролиферативной активности опухоли. Определение уровня Ki-67 имеет важное прогностическое значение, так как наибольшей пролиферативной активностью обладают опухоли из наименее зрелых и дифференцированных клеток.
Все указанные выше маркеры могут быть выявлены при иммуногистохимическом исследовании биоптата или операционного материала опухоли. Для анализа из готового парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями, чтобы было возможно отличить клетки друг от друга и от межклеточного вещества. Затем срезы на стеклах окрашиваются растворами антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичных к одному из исследуемых рецепторов. Если в опухолевой клетке присутствует искомый рецептор, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Кроме того, при просмотре среза врач-морфолог сможет увидеть, что окрашенный маркер располагается в ядре, клеточном веществе или на оболочке опухолевых клеток. Количество применяемых растворов с антителами соответствует количеству маркеров, которые исследуются в образце. Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежат в основе интерпретации результатов иммуногистохимического анализа и подробнее описаны в соответствующем разделе.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
При интерпретации результатов иммуногистохимического определения рецепторного статуса стероидных гормонов (эстрогенов и прогестерона) в опухолях молочной железы следует оценивать не только процент окрашенных антителами клеток, но и интенсивность окрашивания. Оба эти параметра учитываются в шкале Allred, где процент позитивных клеток оценивается от 0 до 5 баллов, а интенсивность окрашивания от 0 до 3. Сумма двух показателей является итоговым баллом, по которому определяется позитивность опухоли по рецепторному статусу: 0-2 негативная, 3-8 позитивная. Общий балл 3 по этой шкале соответствует 1-10% окрашенных клеток и является минимальным позитивным результатом, когда назначение гормональной терапии может иметь эффективность.
Иногда рецепторный статус определяется исключительно по проценту клеток с окрашенными ядрами. В таких случаях NCCN рекомендует считать позитивными все опухоли, где есть более 1% позитивных клеток.
При интерпретации окраски на рецептор HER2/neu учитывают только мембранное окрашивание (окрашивание клеточной оболочки), которое оценивают по шкале от 0 до +3:
результат 0 и +1 считается HER2-негативным;
+2 – пограничный результат, при нем по данным иммуногистохимического исследования нельзя судить о наличии на поверхности клеток рецептора HER2-neu, необходимо проведение FISH- или CISH-исследования;
+3 – положительный результат – таргетная терапия анти-HER2 препаратами будет эффективна.
Согласно классификации St. Gallen Consensus (2009), низким индексом пролиферативной активности считается уровень Ki-67 менее 15%, средним – 16-30%, а высоким – более 30%.
Что может влиять на результат?
Гистологическое исследование биопсийного материала образования молочной железы
Цитологическое исследование пунктатов молочной железы
Определение HER2 статуса опухоли методом FISH
Определение HER2 статуса опухоли методом CISH
Кто назначает исследование?
Онколог, маммолог, онкогинеколог.
Dana Carmen Zaha. Significance of immunohistochemistry in breast cancer. World Journal of Clinical Oncology, 2014; 5(3): 382-392.
NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology: Breast Cancer. Version 3.2017 – November 10, 2017. Available at www.nccn.org.
Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство: в 2 т. – T. I / Под ред. В. В. Долгова, В. В. Меньшикова. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. С. 658-660.
В. Ф. Семиглазов, Р. М. Палтуев, В. В. Семиглазов, Г. А. Дашян, Т. Ю. Семиглазова, П. В. Криворотько, К. С. Николаев. Общие рекомендации по лечению раннего рака молочной железы St. Galle- 2015, адаптированные экспертами Российского общества онкомаммологов. Опухоли женской репродуктивной системы, 2015; 3: 43-60.
Иммуногистохимический анализ рака молочной железы: расшифровка и показания
Иммуногистохимическое исследование – вид изучения тканей при использовании определенных реактивов. После проведения биопсии или операции, взятый материал подвергается окрашиванию для гистологического метода исследования.
При иммуногистохимии рака молочной железы реактивы, которые используют, содержат в себе антитела, меченные определенными веществами. Антитело-белковое соединение, которое образует специфическую реакцию при соединении с другими участками. В результате такого метода можно судить о присутствии разных веществ в тканях.
Иммуногистохимии рака молочной железы: суть метода
В теле человека каждый день происходят иммуногистохимические реакции, суть которых основано на взаимодействии антиген-антитело. Например, при болезни, когда вирусы и бактерии попадают в организм человека, в крови образуются антитела, которые захватывают чужеродные вещества. По такому принципу работает и вакцинация, когда в ответ на вводимые антигены вырабатываются антитела, которые при болезни захватывают чужеродные микроорганизмы.
Обнаружить онкологическое заболевание возможно при использовании иммуногистохимического исследования, например, при раке молочной железы. Метод основывается на введении сыворотки с антителами, который связывается с опухолевые факторы в организме.
Зачем применяют иммуногистохимическое исследование
Множество ученых по всему миру подтвердили наличие ряда определенных факторов в опухолях, которые напрямую связаны с прогнозированием онкологического заболевания и ответом на соответствующее лечение.
К таким факторам принадлежат:
При проведении обычного гистологического исследовании при подозрении на рак грудной железы, невозможно обнаружить такие характеристики, которые может содержать в себе опухоль, поэтому иммуногистохимия рака молочной железы имеет существенное преимущество, перед другими методами исследования.
Где проводится иммуногистохимический анализ рака молочной железы и его расшифровка
Материалом для исследования является опухолевая ткань, забор которой производится во время биопсии или же во время операции. Стоит отметить, что материал должен обязательно браться перед началом курса терапии, иначе результат окажется недостоверным.
Взятый материал помещают в формалин (дезинфицирующее средство) и отправляют в лабораторию. Там проводят его обезжиривание, а затем заливают специальным парафином. Далее образец тонко нарезают на пластины до 1 мкм, раскладывают на предметных стеклах и окрашиваются реактивами необходимой концентрации.
Интенсивность окраски реактивов с опухолевыми клетками зависит от содержания рецепторов. Чем больше их находится в материале, тем интенсивнее будет окраска. Гистологи интерпретирует результаты окраски по специальной шкале:
Получить результаты можно уже через одну-две недели.
В лаборатории Юсуповской больницы опытные специалисты произведут грамотный забор материала и дадут качественную расшифровку полученных данных. Мощная исследовательская база позволить максимально быстро верифицировать диагноз и начать лечение, основываясь на иммуногистохимии опухоли. Огромный опыт враче и среднего медицинского персонала гарантирует пациенту успешность и эффективность от проведенного лечения.