игх исследование молочной железы что это такое
Определение HER2 методом ИГХ
Иммуногистохимическое исследование маркера HER2 при раке молочной железы.
Иммуногистохимическое исследование маркера HER2 это неотъемлемая часть ведения пациентов с инвазивным раком молочной железы. В данной статье мы разберем основные моменты исследования данного маркера врачом-патологоанатомом.
Что такое HER2?
Аббревиатура HER2 расшифровывается как Human Epidermal Growth Factor Receptor-2 (его синонимы: HER2/neu, NEU, NGL, TKR1, c-erbB2, CD340, ERBB2), что переводится как рецептор человеческого эпидермального фактора роста 2. Данный рецептор является членом семейства рецепторов нескольких факторов роста, которые действуют на внутриклеточные сигналы через МАР- и PI3-киназы, регулируя клеточный рост и развитие клетки. Ген ERBB2 локализуется на хромосоме 17 и представляет собой протоонкоген.
В норме HER2 экспрессируется на многих клетках организма, в том числе на эпителии молочной железы. Но при HER2-позитивном раке молочной железы выявляется гиперэкспрессия рецептора/протеина HER2 из-за амплификации (увеличения количества копий) гена ERBB2. Такую гиперэкспрессию определяют при помощи иммуногистохимического метода на мембране клетки, а амплификацию гена можно выявить генетическим методом, например, in situ гибридизация (метод FISH). В 95% случаев гиперэкспрессия маркера HER2 сочетается с амплификацией ERBB2, в 5% случаев наличие гиперэкспрессии обусловлено другими механизмами.
Результаты иммуногистохимического и генетического исследования обычно коррелируют между собой, а иммуногистохимического метода в большинстве случаев достаточно для определения статуса HER2 при раке молочной железы.
По всем возникшим вопросам Вы можете проконсультироваться у нашего медицинского администратора по телефону: 8-800-555-92-67 или написать нам в WhatsApp: +7 925 740 05 87
Клиническое значение
Амплификация HER2 при раке молочной железы встречается примерно в 15% случаев и имеет важное клиническое значение — течение таких опухолей более агрессивное, а прогноз хуже чем при HER2-негативных опухолях. Но самое важное, что позитивные опухоли хорошо поддаются химиотерапевтическому лечению. Расположение рецепторов HER2 на поверхности клеток создает благоприятные условия для атаки химиопрепаратов. Для терапии чаще всего используются препараты на основе HER2-специфичных моноклональных антител (например, трастузумаб).
Перед проведением терапии моноклональными антителами к HER2 очень важно определить действительно ли в опухоли есть амплификация гена. Чаще всего для этого применяется иммуногистохимический метод исследования, а необходимым условием является сохранение антигенных свойств материала — в случае нарушенных антигенных свойств провести достоверное исследование не получится и пациент может не получить важной терапии. Для достижения оптимальной сохранности рецепторов необходима своевременная фиксация препарата опухоли в 10% нейтральном забуференном формалине на протяжении не менее 6 часов (желательная продолжительность не более 72 часов перед проведением исследования, время фиксации зависит от размера исследуемого образца).
Варианты клонов
Существует большое количество разных наборов для определения HER2 и клонов маркера. Нельзя однозначно рекомендовать какой-то один клон — важное значение имеет соблюдение методики исследования в каждой отдельной лаборатории. Даже при наличии самого лучшего маркера нарушение методики приведет к ложному результату. Сравнительные характеристики клонов приведены в таблице ниже (по материалам https://www.nordiqc.org).
Интерпретация результатов анализов
Для интерпретации результата иммуногистохимического окрашивания существуют разработанные рекомендации. В настоящее время большую популярность имеет руководство по оценке от коллегии американских патологов. Результат иммуногистохимического окрашивания делится на четыре степени по баллам: 0, 1, 2, 3, оценка проводится путем световой микроскопии врачом-патологоанатомом с опытом диагностики рака молочной железы.
Возможные варианты оценки:
0 баллов (это негативный результат) — полное отсутствие окрашивания клеток опухоли или крайне слабое и малозаметное окрашивание менее 10 % клеток опухоли.
1 балл (негативный результат) — неполное мембранное слабо заметное окрашивание более 10 % клеток опухоли. Большая часть карцином молочной железы демонстрируют негативный результат (0 или 1 балл).
2 балла (неопределенный или сомнительный результат) — слабое и умеренное полное мембранное окрашивание более 10 % клеток опухоли или выраженное полное мембранное окрашивание менее 10 % клеток опухоли. Встречается примерно в 25% случаев рака молочной железы. Все случаи с сомнительным результатом должны быть подвергнуты дополнительному исследованию HER2 генетическими методами исследования, например, методом in situ гибридизации (метод FISH). В последующей оценке генетического исследования следует учитывать возможную гетерогенность опухоли, когда одни участки опухоли демонстрируют гиперэкспрессию, а другие нет.
3 балла (позитивный результат) — полное выраженное мембранное окрашивание более 10% клеток опухоли. Результат в 3 балла, как правило, легко заметить на малом увеличение микроскопа в виде крупного участка опухоли с выраженной гомогенное экспрессией. Под полным окрашиванием подразумевается непрерывное окрашивание мембраны без пропусков. Выраженное окрашивание — толстый слой красителя на мембране, иногда его называют “проволочная сетка”. Позитивный результат встречается примерно в 15 % рака молочной железы. Чаще результат выражен одинаково по всему объему опухоли, однако, в ряде случаев встречается фокально гиперэкспрессия в разных участках опухоли, в таких случаях патологоанатом должен оценить объем гиперэкспрессии — если она занимает более 10% опухолевой ткани результат считается позитивным. В ряде случаев сопутствующая карцинома in situ демонстрирует гиперэкспрессию, однако, инвазивный рак может быть негативен в маркеру. Гиперэкспрессия HER2 возможна как в первичной опухоли, так и в метастазах.
Причины получения ложных результатов
Ложно негативные результаты иммуногистохимического исследования возможны по следующим причинам:
— длительное нахождение опухоли без фиксации в формалине
— опухолевая гетерогенность, например, исследован только малый фрагмент опухоли, в котором отсутствует амплификация, но в соседнем фрагменте, который не попал в биоптат, реакция может быть позитивной
— нарушение методики исследования или плохое качество используемого маркера
Ложно позитивные результаты возможны при:
— краевых артефактах окрашивания, когда выявлена выраженная реакция по периферии образца, но крайне слабая или негативная реакция в центральной части — в таких случаях нельзя оценивать периферическую реакцию как однозначно позитивную и лучше выполнить исследование заново
— цитоплазматическая экспрессия без достоверной мембранной экспрессии
— избыточное окрашивание образца из-за нарушения протокола исследования
— оценка результата по раку in situ, а не по инвазивному раку.
Как избежать ошибочного результата?
Для того, чтобы патолог при оценке иммуногистохимического исследования был уверен в результате желательно использовать внешний контроль в виде фрагмента рака с заведомо известным HER2-позитивным статусом в 3 балла. Этот контроль помещают на то же стекло, на котором расположен исследуемый образец опухоли пациента.
В случаях когда результат исследования не вызывает доверия у патолога, рекомендуется повторное определение HER2-статуса. Если результат оказался негативным на биопсийном материале, но ткани опухоли в биопсии крайне мало, то следует повторить исследование на операционном материале. Также повтор исследования на операционном материале желательно выполнить для низкодифференцированных карцином и для всех сомнительных результатов.
Игх исследование молочной железы что это такое
Immunohistochemistry, IHС, immunohistochemical analysis.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Образец ткани / образец ткани в парафиновом блоке.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Иммуногистохимическое исследование клинического материала проводится в целях выявления в нем искомых веществ. Готовые гистологические препараты обрабатываются специальными реактивами, содержащими меченые специфические антитела к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Если искомое вещество находится в исследуемом материале, то антитело связывается с его определенными участками. В результате этого между ними образуется комплекс и происходит окрашивание ткани.
Данный метод используется в диагностике различных патологических состояний, особенно велика его роль в области онкологии. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование помогает не только диагностировать опухоль, определить ее нозологический вариант, выявить первичный опухолевый очаг и обнаружить раковое перерождение клеток, но также спрогнозировать варианты течения заболевания и успешность лечения. К факторам, влияющим на прогноз, относятся рецепторы к эстрогенам и к прогестерону, Ki-67 (маркер активности опухоли), her-2 neu (эпидермальный фактор роста, определяет чувствительность опухоли к химиопрепарату трастузумабу/герцептину), VEGF (сосудистый фактор роста), Bcl-2, р53 и др. В отличие от иммуногистохимического анализа, их невозможно определить при обычном гистологическом исследовании.
На основе ИГХ-анализа врач получает заключение с положительными и отрицательными маркерами, и это помогает подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований.
Рак шейки матки относится к наиболее распространенным видам рака у женщин. Эпидемиологические и лабораторные данные подтверждают роль человеческого папиллома-вируса (ВПЧ, HPV) в качестве запускающего агента для подавляющего большинства предраковых и злокачественных поражений эпителия слизистой оболочки шейки матки. При этом ДНК ВПЧ могут быть обнаружены в 95-100% всех случаев.
Вирус папилломы человека представляет собой небольшие циркулярные двухцепочечные вирусы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), принадлежащие к семейству Papillomaviridae. Известно более 130 типов ВПЧ. Они классифицируются по степени риска, основанного на их связи с цервикальной карциномой. ВПЧ 16 и 18 являются наиболее часто встречающимися типами высокого риска. Внедряясь в эпителиальные клетки, вирус вызывает в них дефекты генов, тем самым способствуя развитию опухоли. При помощи ИХГ легко обнаружить в клетках, пораженных HPV, экспрессию белков p16 и p18, и их позитивность сильно коррелирует с позитивностью HPV. Это помогает различить неопухолевую дисплазию (как результат воспаления) и опухолевую (вызванную вирусом папилломы и способную переродиться в рак), а также позволяет провести дифференциальную диагностику дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II/III) и начальных форм рака шейки матки, выявление поражений, склонных к прогрессированию и развитию инвазивной карциномы. В дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80-100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки определяется усиленная экспрессия белка p16, и она усиливается по мере нарастания тяжести поражения.
У женщин с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями низкой степени тяжести очаговая и диффузная экспрессия свидетельствует о прогрессировании заболевания. Отсутствие или очаговая экспрессия p16 в поражениях высокой степени может служить дополнительным признаком благоприятного течения патологического процесса.
Применяется иммуногистохимическое исследование и при дифференциальной диагностике целиакии.
Целиакия – это системное заболевание, обусловленное генетической непереносимостью глютена или соответствующих проламинов, которые содержатся в семенах злаков. Характеризуется данная патология повреждением слизистой оболочки тонкой кишки (развитием атрофической энтеропатии), появлением в сыворотке крови специфических антител и широким спектром глютензависимых клинических проявлений. Заболевание встречается в два раза чаще среди женщин, чем среди мужчин, может впервые проявиться как в детстве, так и у взрослых. Целиакия может протекать с ярко выраженной или со стертой клинической картиной, а также без гастроэнтерологической симптоматики. Чаще всего встречается стертый вариант течения заболевания, поэтому диагностика глютеновой энтеропатии (ГЭ) затруднена.
На первичном лабораторном этапе проводится серологическое исследование, определяющее в крови специфические биомаркеры. Лицам с положительными результатами показана эндоскопия тонкой кишки с биопсией и последующим гистологическим и ИГХ анализом взятого материала.
Известно, что целиакия сопровождается повышением числа лимфоцитов внутри эпителиальных клеток тонкой кишки. При этом отличительной особенностью является то, что большинство интраэпитиальных лимфоцитов (ИЭЛ) несут на своей поверхности специфический Т-клеточный рецептор (CD3 γ и CD3δ-положительные клетки). Чем активнее протекает заболевание, тем больше ИЭЛ. Эта особенность используется при проведении иммуногистохимического исследования, позволяющего определить преобладающий тип лимфоцитов. Особенно важен этот анализ, когда существует расхождение между данными серологического исследования и гистологической оценкой на стандартных участках.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Что означают результаты?
Диапазон значений индивидуален для каждого заболевания, зависит от используемых антител.
Расшифровка результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом.
Проводится морфологическая оценка препарата (опухоли классифицируются согласно ВОЗ), дается описательный ответ с указанием оценки экспрессии антитела. ИХГ всегда следует использовать в качестве дополнения к морфологическому исследованию, результаты не следует интерпретировать изолированно.
Что может влиять на результат?
При некоторых заболеваниях есть факторы, которые могут влиять на результат. Так, при диагностике целиакии назначение безглютеновой диеты до исследования может приводить к получению ложноотрицательного результата.
Кто назначает исследование?
Онколог, гинеколог, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.
Гормональный статус при раке молочной железы + определение HER-2/neu
Иммуногистохимия (ИГХ) – метод выявления точной локализации того или иного клеточного или тканевого компонента (антигена) благодаря связыванию его с мечеными антителами. Для проведения иммуногистохимического исследования используются фрагменты ткани опухоли, удаленной хирургическим путем или полученные в результате биопсии. ИГХ-исследование позволяет определить тип низкодифференцированной опухоли, гистогенетическую принадлежность, наличие в ткани опухоли специфических рецепторов гормонов, других сигнальных молекул. Иммуногистохимия востребована при дифференциальной диагностике опухолей, определении источника метастаза при неясном первичном очаге, оценке гормонального статуса опухоли, иммунофенотипировании опухолей, определении факторов прогноза опухолевого процесса и для адекватного выбора схемы химиотерапевтического лечения.
Онкобелок HER2/neu (Human Epidermal growth factor Receptor 2) –трансмембранный гликопротеин, который является представителем семейства рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR). У человека рецептор HER2/neu выявляется в нормальных тканях, однако его гиперэкспрессия характерна только для опухолевых клеток. Ведущим механизмом увеличения количества HER2/neu является амплификация кодирующего его гена HER2/neu. Определение рецепторов эстрогена (ER) и прогестерона (PR) в опухолевой ткани при раке молочной железы используют для оценки чувствительности опухоли к гормональным препаратам и подбора схемы терапии.
Биоматериал: микропрепараты (блок + стекло).
Метод анализа: иммуногистохимический.
Заключение. Интенсивность окрашивания мембран клеток оценивают по шкале: 0, 1+, 2+, 3+. При 0 и 1+ рак молочной железы является HER2-отрицательным, при 3+ – HER2-положительным. В случае 2+ целесообразно проводить определение амплификации гена HER2 методами in situ гибридизации (CISH) (см.220018). Указывается наличие экспрессии к рецепторам эстрогена и прогестерона в баллах и в соответствие с полученным результатом выдается заключение о выраженности экспрессии.
Иммуногистохимическое исследование злокачественных опухолей без выявленного первичного очага в Москве
Злокачественные новообразования без выявленного первичного очага — группа различных по происхождению онкологических заболеваний, при которых клиническое проявление связано с распространением метастазов, а выявление первичного опухолевого источника крайне затруднено. Данный лабораторный анализ способствует выявлению первичного очага на основании гистологического исследования ткани с метастатическим поражением.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ Иммуногистохимическое исследование злокачественных опухолей без выявленного первичного очага?
При невозможности определить первичный опухолевый очаг онкологического заболевания стандартными методами диагностики
Подробное описание исследования
Иммуногистохимическое исследование (иммуногистохимия, ИГХ) является методом гистологической (морфологической) диагностики. Метод ИГХ основан на иммуноферментном окрашивании: в исследуемом образце ткани при помощи маркеров (антител) устанавливают наличие и локализацию определенных биологических мишеней (антигенов). Выявление этих антигенов позволяет определить следующее:
В случае диагностики злокачественных новообразований с неустановленным первичным очагом иммунногистохимический анализ помогает определить гистологическое строение метастаза (отдаленный вторичный очаг опухоли) при помощи ткане- или органоспецифичных маркеров («антител»). В конечном итоге результат ИГХ чаще всего позволяет выявить первичный опухолевый источник.
Злокачественные новообразования без установленного опухолевого источника — группа из разных по происхождению онкологических заболеваний, при которых клинические проявления метастазов возникают первично и предшествуют симптомам со стороны основного опухолевого источника. На сегодняшний день такие опухоли встречаются довольно часто — 3-5% от общего количества онкологических заболеваний. Метастазы при подобных злокачественных опухолях характеризуются широким распространением по всему организму и подчас могут иметь непредсказуемые локализации. При этом метастатическая диссеминация — на фоне невыявленного первичного очага — чаще всего протекает довольно быстро и агрессивно.
Такие злокачественные новообразования также называют CUP-синдромом (англ. cancer of unknown primary). К этой группе могут быть отнесены следующие онкологические заболевания:
Основные клинические проявления у пациентов с CUP-синдромом связывают с метастатическим поражением лимфатических узлов, печени, костей и легких. В большинстве случаев — около 75% — наблюдается сочетанное поражение нескольких органов. Симптомы развиваются исходя из локализации и степени поражения органа.
Иммуногистохимическое исследование при CUP-синдроме обычно назначают в том случае, когда при помощи стандартных диагностических методов не смогли обнаружить опухолевый источник. В рамках определения первичного очага при ИГХ используют широкий спектр ткане- и органоспецифических маркеров:
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (ER, PR, Her2/neu, Ki67) в Ростове-на-Дону
Исследование ткани молочной железы на предмет степени экспрессии генов белков, формирующих молекулярный портрет опухоли. От этих параметров зависит тактика лечения, выбор противоопухолевых препаратов и прогноз заболевания. Оценка экспрессии этих белков рекомендована ассоциацией онкологов России для лабораторной диагностики рака молочной железы.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ (ER, PR, Her2/neu, Ki67)?
Подробное описание исследования
Иммунногистохимическое исследование представляет собой микроскопический анализ ткани, предварительно окрашенной высокоспецифичными антителами. Антитела – молекулы, которые ультраспецифично связываются с белками клеток. Если ими окрасить ткань опухоли, краситель проявится только в участках связывания. В данном исследовании окрашиванию подвергаются молекулы ER, PR, Her2/neu, Ki67. Немного подробнее о них:
ER (estrogen receptor): рецептор эстрогена. Эстроген – женский половой гормон. Опухоли молочной железы гормон-зависимы. Это значит, что действие гормонов определяет процесс развития опухоли и ее податливость лечению. Около 1/3 от всех случаев опухолей молочной железы вырабатывают очень много рецепторов к эстрогену, больше молекул гормона связываются с ними и вызывают внутриклеточный ответ. Усиленное связывание эстрогена с рецепторами вызывает трансформацию здоровых клеток молочной железы в опухолевые. У пациенток с высокой экспрессией ER хороший леченый эффект показывает заместительная гормональная терапия: в качестве лекарства используют молекулы, похожие на эстроген, но не вызывающие клеточного ответа. Эти молекулы занимают место на рецепторе и не дают ему связаться с настоящим эстрогеном, а значит, блокирует все его эффекты, приводящие к прогрессированию рака молочной железы (РМЖ).
PR (progesterone receptor): рецептор к прогестерону. Прогестерон – еще один женский половой гормон. Он тоже вызывает прогрессирование РМЖ. Точнее, таким эффектом обладают продукты его переработки клеткой. Его метаболиты стимулируют дополнительное деление клеток (разрастание опухоли), угнетает механизмы клеточной гибели и способствуют развитию метастазов. Помимо этого, прогестерон стимулирует выработку большего количества рецепторов к эстрогену.
Her2/neu – рецептор эпидермального фактора роста. Связывание с фактором роста дает клетке сигнал к росту и делению. Повышенная экспрессия этого белка наблюдается примерно в 30% случаев рака молочной железы. Выработка этого рецептора обуславливает агрессивность опухоли и неблагоприятный прогноз течения болезни. Her2/neu – мишень одного из противоопухолевых препаратов (трастузумаб). Трастузумаб блокирует связывание рецептора с фактором роста, опухолевая клетка не получает сигнала к выживанию и росту и развитие рака молочной железы замедляется или вовсе прекращается.
Ki67 – белок клеточного ядра, ассоциированный с клеточным делением. Чем чаще делятся клетки, тем больше вырабатывается этого белка и тем быстрее растет опухоль. Этот белок не используется в качестве мишени для лекарств, но его количество – показатель интенсивности развития опухоли и скорости ее роста. Степень экспрессии этого белка помогает прогнозировать течение болезни и оценить агрессивность опухоли.
Особенности и преимущества методики
Cветовая микроскопия гистологических препаратов обработывается маркированными специфическими антителами